产品名称：核酸相关>反转录与PCR>PCR相关 （ 2X PCR Master Mix）

产品简介：2X PCR Master Mix中含有2X Taq DNA Polymerase，2X PCR Buffer，2X dNTP，只需加入适量引物、模板和水即可进行PCR扩增。大大简化了PCR操作，使操作更加快捷，也减少了PCR操作过程中可能导致的污染，使PCR的重复性更好。
利用2X PCR Master Mix可以进行各种常规的PCR扩增，特别适合用于定性和半定量的PCR扩增，以及2kb以下DNA片段的T载体克隆。
2X PCR Master Mix可以扩增出长达8kb的片段，但通常更适合用于扩增2kb以下的DNA片段。
本产品稳定性高，经测试，反复冻融15次后对PCR的扩增效果无显著影响。
本试剂盒用于50微升的PCR反应体系，足够用于160个反应；用于20微升的PCR反应体系，足够用于400个反应。

使用说明：

1. 1.PCR反应体系的设置：
   1. a.融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。将2X PCR Master Mix置于冰浴上或冰盒内。
   2. b.参考下表在冰浴上设置PCR反应体系：

      试剂	最终浓度	体积	体积
      双蒸水或Milli-Q水	-	(21-x)μl	(8.4-y)μl
      模板DNA	10pg-1μg*	xμl	yμl
      引物混合物(10μM each)	0.8μM	4μl	1.6μl
      2X PCR Master Mix	1X	25μl	10μl
      总体积	-	50μl	20μl

      • 对于不同类型的模板在50μl反应体积中推荐用量如下：
        哺乳动物基因组DNA：0.1-1μg；大肠杆菌基因组DNA：10-100ng；质粒DNA：0.1-10ng。
        过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物。
   3. c.用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀，室温离心数秒，使液体积聚于管底。
   4. d.如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油(mineral oil，ST275)。
   5. e.把设置好的PCR反应体系置于PCR仪上，开始PCR反应。
2. 2.PCR反应参数的设置可以参考如下示例：
   • STEP1(起始变性): 94℃ 3min
   • STEP2(变性): 94℃ 30sec
   • STEP3(退火): 55℃ 30sec
   • STEP4(延伸): 72℃ 1min
   • STEP5(循环): Go To STEP2 for 30 cycles
   • STEP6(最终延伸): 72℃ 10min
   • STEP7(临时保存): 4℃ forever
3. 注意：
   1. a.PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间和循环数等。
   2. b.STEP4(延伸)的时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，通常每kb产物的延伸时间为1分钟。例如PCR产物的长度为1kb，则延伸时间可以设置为1分钟，PCR产物的长度为2kb，则延伸时间可以设置为2分钟，以此类推。
   3. c.对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应循环数一定要进行适当优化，使PCR反应没有达到平台期。
4.  

保存条件：
-20℃保存，至少一年有效。
注意事项：
由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Taq酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
Taq DNA polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2×10^-5，对于大于1kb的DNA片段的克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase、BeyoTaq DNA polymerase等。对于普通的PCR或RT-PCR定性检测或定量检测，Taq DNA polymerase是最佳选择。
尽管本产品经过15次反复冻融后仍具有和冻融前几乎相同的PCR扩增效果，但仍宜适当避免反复冻融本产品，多次反复冻融可能使产品性能下降。
使用本产品前，一定要完全融化，并上下颠倒轻轻混匀后才能使用，尽量避免起泡。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

上海化科实验器材有限公司主要生产经营：实验室器材，玻璃仪器，实验室耗材，生物耗材，化学试剂，微生物试剂，样品瓶，包装瓶，实验室设备，仪器仪表等。
广泛服务于：科研，制药，生物，生命科学，教育，污水处理，食品与饮料，电子，轻工业，矿业，石油天然气，石油化学工业，工业品仪器，环保工程等行业。
公司网站：http://www.shhk.com.cn
订单邮箱：sales@shhk.com.cn（推荐）
咨询电话：021-67652117，57602161
QQ 在线：1152028600。